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      标题:细胞质内高表达的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21抑制人支气管上皮细胞凋亡
      作者:邹国明,肖祖克    (江西省人民医院呼吸与危重症医学科,江西 南昌 330006)
      卷次: 2018年29卷19期
      【摘要】 目的 研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21抑制人支气管上皮细胞凋亡的机制。方法 (1)表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21的质粒PEGFP-N1-p21转染人支气管上皮细胞系16HBE,研究P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与质粒转染后细胞凋亡表现之间的相互关系。实验分组包括空白对照、空质粒及PEGFP-N1-p21质粒组,应用Westen-blot方法检测质粒转染24 h后P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化相对值,流式细胞仪方法检测质粒转染24 h、48 h后的细胞凋亡率。(2)转化生长因子-β1 (TGF-β1)刺激人支气管上皮细胞系16HBE,研究TGF-β1刺激后P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化与支气管上皮细胞凋亡之间的相互关系。实验分组包括TGF-β10 ng/mL、TGF-β1 3 ng/mL及TGF-β1 10 ng/mL组,应用Westen-blot方法检测TGF-β1刺激 24 h后 P21蛋白在细胞质、细胞核内的表达变化,流式细胞仪方法检测TGF-β1刺激12 h、24 h后的细胞凋亡率。结果 质粒PEGFP-N1-p21转染人支气管上皮细胞系16HBE 24 h后,PEGFP-N1-p21质粒组的P21蛋白在细胞质内表达水平高于空质粒组、空白对照组,并高于同组细胞核内,差异均有统计学意义(P<0.05);空质粒组、空白对照组的细胞质内P21蛋白表达水平低于细胞核内,差异均有统计学意义 (P<0.05)。PEGFP-N1-p21质粒转染24 h、48 h后,PEGFP-N1-p21质粒组凋亡率低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。PEGFP-N1-p21质粒转染24 h后的16HBE细胞凋亡率高于转染48 h后,而空质粒组和空白对照组表现相反结果。PEGFP-N1-p21质粒转染后,P21蛋白在细胞质内表达与转染后的细胞凋亡呈负相关。TGF-β1 (0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于 16HBE细胞 24 h后,TGF-β1 3 ng/mL及 10 ng/mL组的细胞核、细胞质内 P21蛋白表达均高于TGF-β1 0 ng/mL组,差异均具有统计学意义 (P<0.05),TGF-β1 3 ng/mL及 10 ng/mL组的细胞质中 P21蛋白表达均高于细胞核内 P21蛋白(P均<0.05),10 ng/mL组胞质 P21蛋白表达量低于 3 ng/mL组(P<0.05)。TGF-β1 (0 ng/mL、3 ng/mL、10 ng/mL)作用于 16HBE细胞 12h、24 h后,同一作用时间下,随着TGF-β1刺激浓度增加,细胞凋亡率增加,TGF-β1 (3 ng/mL、10 ng/mL)作用于16HBE细胞12 h、24 h后,同一作用浓度下,随着刺激时间延长,细胞凋亡率增加(P均<0.05)。TGF-β1作用于人支气管上皮细胞系 16HBE后,细胞质内 P21蛋白增加与刺激后的细胞凋亡呈负相关。结论 PEGFP-N1-p21质粒转染人支气管上皮细胞后,P21蛋白表达于细胞质,抑制人支气管上皮细胞凋亡。TGF-β1作用于人支气管上皮细胞系16HBE后,刺激细胞质内P21蛋白表达增加,随着细胞质内P21蛋白表达下降,细胞凋亡增加。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21可通过在细胞质内高表达这一机制抑制人支气管上皮细胞凋亡。
      【关键词】 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P21;转化生长因子-β1;细胞凋亡
      【中图分类号】 R-329.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—6350(2018)19—2665—05
Cytoplasmic highly-expressed cyclin-dependent kinase inhibitor P21 inhibits the apoptosis of human bronchialepithelial cell. ZOU Guo-ming, XIAO Zu-ke. Department of Respiratory and Critical Medicine, Jiangxi Provincial People'sHospital, Nanchang 330006, Jiangxi, CHINA
      【Abstract】 Objective To investigate the mechanisms of cyclin-dependent kinase inhibitor P21 inhibiting theapoptosis of human bronchial epithelial cells (HBECs). Methods The relationship of the expression of cytoplasm andnuclear cyclin-dependent kinase inhibitor P21 with the apoptosis of 16HBE cells was studied after the plasmid PEGFP-N1-p21was transfected into the 16HBE cells, and the experiment included the blank, the empty plasmid and the PEGFP-N1-p21 group.The expression of P21 protein in cytoplasm and nucleus was detected by Western-blot after 24 hours of plasmid transfec-tion. The apoptosis rate was detected by flow cytometry after 24 hours and 48 hours of plasmid transfection. The relation-ship of the expression of cytoplasmic and nuclear cyclin-dependent kinase inhibitor P21 with the apoptosis of 16HBEcells was studied after the stimuli of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) to 16HBE cells, and the experiment includ-ed TGF-β1 0 ng/mL, TGF-β1 3 ng/mL, and TGF-β1 10 ng/mL group. The expression of P21 protein in cytoplasm and nu-cleus was detected by Western-blot after 24 hours of the stimuli of TGF-β1. The apoptosis rate was detected by flow cy-
      基金项目:江西省科学技术厅科技支撑计划(编号:2009BSA10700)

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