标题：小鼠原代骨髓单核细胞分离与培养方法的改进

      作者：李香敏 1，王华 1，张春蕾 1，蒙军平 1，张冰 2，张平 2    1.空军军医大学第二附属医院肾脏内科，陕西 西安 710038；2.空军军医大学第一附属医院心血管外科，陕西 西安 710032

      卷次： 2023年34卷1期

      【摘要】 目的 探索更好的原代小鼠骨髓单核细胞的分离与培养方法。方法 将小鼠股骨取出置入预冷的PBS中修剪、冲出骨髓组织至预冷的DMEM培养基中，吹打混匀制成单细胞悬液后过滤。应用差速贴壁方法培养6~8 h后留取未贴壁的细胞，加入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)培养7 d，获得小鼠骨髓单核巨噬细胞。光镜下观察细胞形态；流式细胞术检测骨髓单核巨噬细胞表面抗原CD11b、F4/80的表达，评估细胞纯度；应用转化生长因子(TGF)-β1和M-CSF培养将其诱导分化为肌成纤维细胞，免疫印迹检测其标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果 冰上预冷缩短热缺血时间方法分离的骨髓单核细胞损伤小，细胞形态均一，纯度高(可达95%以上)，较对照组有所升高，但差异无统计学意义 (P>0.05)；加入TGF-β1共培养后可见细胞呈细长纺锤形，与对照组相比，α-SMA的表达明显升高，差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论 本方法分离提取的原代小鼠骨髓单核细胞纯度高，状态良好，表型稳定，满足做进一步实验研究的要求。
      【关键词】 骨髓单核细胞；细胞培养；流式细胞术；巨噬细胞集落刺激因子；转化生长因子
      【中图分类号】 R-332 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003—6350（2023）01—0087—04

Improvement of isolation and culture method of primary mouse bone marrow monocytes.
LI Xiang-min 1, WANGHua 1, ZHANG Chun-lei 1, MENG Jun-ping 1, ZHANG Bing 2, ZHANG Ping 2. 1. Department of Nephrology, the SecondAffiliated Hospital, Air Force Medical University, Xi'an 710038, Shaanxi, CHINA; 2. Department of Cardiovascular Surgery,the First Affiliated Hospital, Air Force Medical University, Xi'an 710032, Shaanxi, CHINA
【Abstract】 Objective To explore a better method for the isolation and culture of primary mouse bone marrowmonocytes (BMMC). Methods The mouse femurs were taken out and placed in pre-cooled phosphate buffered saline(PBS) for trimming, and the bone marrow tissue was flushed out and placed into pre-cooled DMEM medium, and the sin-gle-cell suspension was prepared by pipetting and mixing, and then filtered. After culturing for 6-8 hours by the differen-